試劑及用品

1.預(yù)包被板條48/96T;                              6.樣本稀釋液(5號(hào)液)1支;

2.酶結(jié)合物(1號(hào)液)1支;                            7.終止液(6號(hào)液)1支;

3.洗滌液(2號(hào)液)1支;                               8.陽(yáng)性對(duì)照血清1支;

4.底物(3號(hào)液)1支;                                  9.陰性對(duì)照血清1支;

5.顯色液(4號(hào)液)1支;                             10.使用說明書1份;

操作方法

1.樣本稀釋：用樣本稀釋液(5號(hào)液)將待檢血清按1:100稀釋。陰、陽(yáng)對(duì)照不用稀釋,直接加樣。

2.加樣反應(yīng)：樣本檢測(cè)孔每孔分別加已稀釋樣本血清100ul。同時(shí)設(shè)陰性、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1孔，取陰性、

陽(yáng)性對(duì)照各100ul分別加入反應(yīng)孔內(nèi)，空白對(duì)照孔僅加入100ul樣本稀釋液(5號(hào)液)。37℃避光反應(yīng)30分鐘后甩去孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液(2號(hào)液)1滴，立即用蒸餾水注滿，靜置30秒后甩去，再直接用蒸餾水洗滌四次，每次均需靜置30秒，*后一次甩去，拍干。

3.加酶反應(yīng)：除空白對(duì)照孔外其余每孔加酶結(jié)合物(1號(hào)液)2滴，37℃避光反應(yīng)30分鐘后甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

4.顯色反應(yīng)：每孔加底物(3號(hào)液)和顯色劑(4號(hào)液)各1滴，混勻，37℃下避光顯色10分鐘。加終止液(6號(hào)液)1滴，混勻，終止反應(yīng)（加終止液后藍(lán)色會(huì)變?yōu)辄S色）。

結(jié)果判斷

1.肉眼觀察：陰性對(duì)照接近無(wú)色，陽(yáng)性對(duì)照呈明顯黃色，表示實(shí)驗(yàn)有效。待檢孔接近無(wú)色表示該標(biāo)本為陰性，待檢孔呈明顯黃色表示該標(biāo)本為陽(yáng)性。

2.儀器判斷：以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm（620nm作參比波長(zhǎng)）讀取O.D值。待檢孔O.D值大于陰性對(duì)照2.1倍者為陽(yáng)性。當(dāng)陰性對(duì)照O.D值低于0.07時(shí)按0.07計(jì)算。

注意事項(xiàng)

1.試劑盒在2-8℃下保存,有效期六個(gè)月。，每次取出時(shí)先平衡至室溫后使用。滴瓶每次用后一定要將蓋擰緊，各瓶蓋之間切不可混用。各試劑盒之間不可混用。

2.洗滌時(shí)將蒸餾水加滿各孔，每次停放三十秒鐘，甩去孔內(nèi)液體。禁用自來(lái)水等其它水源。

3.為提高實(shí)驗(yàn)的可比性建議使用儀器判讀結(jié)果，并對(duì)陰性對(duì)照測(cè)復(fù)孔以減少誤差。